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暗視野顯微鏡是什么原理,具體用在什么領域?

發布時間:2020/4/9

 暗視野顯微鏡也是生物顯微鏡的一種延續,通過改變聚光鏡的使用和光路的改變使用通過觀察試樣的觀察中散射通過觀察光(光束),高對比度超微結構技術觀察那個 光學和電子顯微鏡中使用的一種技術。

在普通光學顯微鏡(明場照明)的情況下,放置在照明光顏色(燈泡顏色,暖白色等)的明亮背景中的樣品會阻擋該光并觀察到比背景暗的狀態。另一方面,暗視野分光鏡從傾斜方向照射,使得光不進入物鏡,并觀察由樣品散射的光。在這種情況下,明亮的樣品出現在深色背景上并被觀察到。這種照明方法稱為暗場照明。

 暗視野顯微鏡為了通過這種方法進行觀察,通常使用帶有專用暗場聚光鏡的光學顯微鏡。對于生物顯微鏡,可以使用便宜的干式聚光鏡和油浸式聚光鏡來提供更明亮的照明。還有一種使用相差電容器進行暗場觀察的技術。通過用學習顯微鏡體視顯微鏡從被檢體側面用閃光燈發出的光來進行暗場觀察是可能的。

暗視野顯微鏡效果通過暗視野顯微鏡果蠅的胚胎觀察的例子。在明亮的視野中可以看到難以觀察到的精細結構。

暗場顯微鏡的**優勢在于,它可以輕松,廉價地檢查低對比度,超細結構,微病原體和微劃痕的樣品。此外,由于不需要諸如熒光染色的操作,因此不會發生由于該操作而導致的偽影。


但是,暗場照明方法僅易于觀察精細結構,而不能提高分辨率(分辨率)本身。分辨率取決于數值孔徑。應該注意的是,暗視野光譜儀僅用具有高數值孔徑分量的光進行照明,因此不能使用具有高數值孔徑的物鏡(小于NA.0.8)。


另外,基本上不能使用具有厚度的樣品(在落射照明的情況下,存在使用具有遮光狹縫的物鏡,照明鏡和暗視野照明機構的方法)。


此外,作為設備的限制,為了獲得明亮的圖像,需要高亮度照明(盡管不如相襯顯微鏡那么多)。


暗視野顯微鏡原理

載玻片上的樣品會引起散射(主要是Mie散射),對照明光的衍射和反射。在暗視野照明中,由于照明光被限制在較高的數值孔徑分量(圓錐形外周表面結構)中,因此該散射光基本上進入物鏡。


暗場聚光鏡基本上是普通的顯微鏡聚光鏡,其膜片葉片附著在太陽上,結構簡單。因此相對便宜。


在使用可見光的光學顯微鏡中,根據光的波長,理論上分辨率被限制在大約200 nm。即使不可能在更接近分辨率的兩個對象之間進行區分,也可以檢測尺寸小于分辨率的對象或檢測小于分辨率的運動。由于容易獲得高對比度圖像的特征,暗場顯微鏡通常用于檢測這種精細結構和精細運動。對于這種先進的暗場觀察,不僅使用了暗場聚光器,而且還使用了激光傾斜照明,通過光的全反射在界面處形成的field逝場進行照明,通過錐形透鏡進行照明。

作為類似的方法,存在從傾斜方向進行照明的“傾斜照明”。在這種情況下,照明的方向性應被稱為暗場照明,并且存在一種裝置,該裝置在普通的明場聚光器中結合了傾斜照明機構,并且可以通過一次觸摸而切換到傾斜照明模式。


如果使用相差顯微鏡用的聚光鏡和數值孔徑小的物鏡,則可以容易地實現暗場分光鏡。


由于用熒光顯微鏡觀察會切出背景光而僅觀察到激發光,因此不可避免地要進行暗視場顯微鏡檢查。


在掃描電子顯微鏡中,選擇性檢測衍射波并以高對比度觀察二次電子的技術稱為暗場觀察。這是通過調節物鏡孔徑的位置并順便用電子束掃描束來完成的。


在X射線攝影中,通過檢測X射線的折射來觀察高對比度的物體的技術被稱為“ X射線暗場法”,并且正在被研究。


一些光學小鼠使用暗視野顯微鏡。這種類型的鼠標也可以在透明玻璃或光滑表面(例如大理石或漆)上使用。以上就是暗視野的用處,具體不明可以咨詢上海譜騫光學儀器有限公司技術部021-57632373

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